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pmD18载体 连接不上

既然连上去了怎么可能切不掉。。。 你确定连上去了么。。。 几个条带不重要 关键是有没有那个片段大小的条带

pMD18T连一段多长的DNA,连接DNA用量及时间?转化到哪个感受态细胞中?Amp抗性平板长菌情况如何? 仔细观察以上问题,考虑是否转化不成功。 培养基的体积是否小于试管体积的1/5?摇菌转数是否达到250rpm,试管要斜放? 是否观察过菌体生长过程(...

博凌科为-为你解答:PCR中的taq酶一般是直接加A的,也就是你PCR做完只要割胶纯化就可以直接连了,不用额外想着加A什么的。但是要注意的是PCR反应后不能放置太久,一般当天就做T-A克隆,最好不要超过2、3天,越早做越好,因为即便放在-20也是会掉...

M13F(-47):CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC M13R(-48):AGC GGA TAA CAA TTT CAC ACA GGA

用这两种引物:BcaBEST Sequencing Primer M13-47和BcaBEST Sequencing Primer RV-M Vector size (bp) 2692 Cloning Site 425 LacZ α-peptide 146-475 Ampicillin resistance gene 1632~2492 pUC origin 873-1461 primer binding sites: BcaBES...

在插入序列2端用PCR连接上不同的酶切位点(和载体的位置相对),用酶处理PCR产物和载体,然后再连接就可以了。

目的基因和载体比例最好再核对一下,连接时间放久一点试试

你从载体MAP上看到的启动子终止子只是启动和终止目的基因表达的控制元件。而事实上质粒复制以及质粒功能的实现(比如说抗性)都需要启动载体基因的表达,也就是说,质粒载体上除了你在图上看到的启动子,还有若干个质粒结构基因的启动子,只是这...

pMD®19-T Vector是线性的,必须是3'段有A的目的基因片段才可以和pMD®19-T Vector连接。 另外pMD®19-T simple是指消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点,由于本载体上消除了多克隆酶切位点,克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制...

用 M13F(-47):CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC M13R(-48):AGC GGA TAA CAA TTT CAC ACA GGA

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